الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) لديها مجموعة واسعة من المصادر. لقد كانت الخلايا الجذعية السرطانية المشتقة من النخاع العظمي هي الأكثر دراسة على نطاق واسع، لكن قدرتها التكاثرية ضعيفة نسبيًا وتتناقص مع تقدم عمر المتبرع. من السهل الحصول على الخلايا الجذعية السرطانية المشتقة من الدهون، وتتمتع بقدرة مناعية أفضل من تلك المشتقة من النخاع العظمي، وتظهر قدرة تكاثرية قوية في المرحلة المبكرة. الخلايا الجذعية السرطانية المشتقة من الحبل السري، والمعروفة بخصائص 'الخلايا ذات العمر الصفري' وانخفاض المناعة، تحظى بتفضيل كبير وأصبحت نقطة بحث ساخنة. ولذلك، في التحول السريري والتطبيق، يتم تنفيذ استخدام الخلايا الجذعية السرطانية المشتقة من الحبل السري والمشتقة من الدهنية بشكل أكثر شيوعا.
معالجة العينات، باعتبارها 'الخطوة الأولى' في ثقافة MSC في المختبر، تحدد بشكل مباشر نجاح أو فشل التجارب اللاحقة. سيركز هذا الدليل بشكل أساسي على المشكلات الشائعة في اختيار عينات الحبل السري ومعالجتها، مما يساعدك على الحصول على بداية سلسة قبل الزراعة.
س: كيفية اختيار الحبال السرية المؤهلة لزراعة الخلايا الجذعية السرطانية المشتقة من الحبل السري؟
يعد اختيار الحبال السرية أيضًا رابطًا حاسمًا للسلوك السلس لتجربة العزلة الأولية لـ MSCs من الحبل السري.
شروط الحصول على حبل سري عالي الجودة:
لا توجد وذمة أو احتقان واضح في الحبل السري.
جيلي وارتون السميك (WJ) في الحبل السري؛
حبل سري جديد، ويفضل استخدامه مباشرة بعد جمعه، ولا يجوز تخزينه لمدة تزيد عن 48 ساعة؛
- أن لا تكون الأم المانحة مصابة بأي أمراض معدية.
شروط تخزين ونقل الحبال السرية:
يجب تخزين الحبل السري في محلول حفظ عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. إذا تم نقلها في حالة جافة، فإنها تكون عرضة للوذمة وبطء هجرة الخلايا إلى خارج الأنسجة؛
ينبغي استخدام الحبل السري خلال 48 ساعة بعد جمعه؛ هناك احتمال معين بعدم هجرة أي خلايا من الحبل السري المخزن لأكثر من 72 ساعة؛
يجب تخزين الحبل السري في محلول حفظ يحتوي على 1% مضاد حيوي؛ خلاف ذلك، هناك خطر كبير للتلوث.
س: ما هي الأمور التي يجب ملاحظتها عند اختيار الحبال السرية؟
قد تؤدي وذمة الحبل السري وجيلي وارتون الشفاف أو الشفاف إلى هجرة عدد أقل وأبطأ من الخلايا خارج كتل الأنسجة؛
قد يؤدي الحبل السري الملتوي أو الضموري إلى بطء هجرة الخلايا خارج الكتل النسيجية؛
قد يسبب الاحتقان الشديد في الحبل السري هجرة الخلايا ببطء خارج كتل الأنسجة، ويمكن رؤية عدد كبير من خلايا الدم الحمراء في طبق الثقافة؛
قد تؤدي العملية غير الصحيحة أثناء قطع الحبل السري وإزالته من غرفة الولادة إلى التلوث.
الحلول الموصى بها:
اختيار الحبل السري الممتلئ بدون وذمة أو احتقان شديد، وقطع الأجزاء الصغيرة المتورمة أو الضامرة أو المحتقنة. إذا لم يتعرض المختبر للتلوث بشكل متكرر، يمكن شطف الحبل السري 3-5 مرات بمحلول ملحي يحتوي على 1٪ من الأجسام المضادة المزدوجة (البنسلين والستربتومايسين) أو 25 ملجم / لتر جنتاميسين. إذا تم اكتشاف التلوث بشكل متكرر، اشطف الحبل السري باستخدام 75% من الإيثانول لمدة 40-60 ثانية أولاً، ثم اغسله 10-20 مرة بكمية كبيرة من المحلول الملحي الذي يحتوي على 1% من الأجسام المضادة المزدوجة.
س: ما هي تصنيفات الخلايا الجذعية الوسيطة للحبل السري؟
الحبل السري عبارة عن نسيج يشبه الحبل يربط بين الجنين والمشيمة، وهو مسؤول عن تبادل الغازات وإمدادات المغذيات وإفراز المنتجات الأيضية بين الأم والجنين. خصائصه الأساسية هي كما يلي:
وقت التطور: يبدأ التطور بعد 4-8 أسابيع من تكوين الجنين البشري؛
البيانات المورفولوجية: متوسط الطول 55 سم، القطر 14.42 ملم، الوزن 40 جرام؛
التركيب الهيكلي: مغطى بغشاء سلوي (أبيض مصفر) على السطح، ويحتوي بداخله على وريد سري واحد وشريانين سريين. يحيط بالأوعية الدموية نسيج غرواني عديم اللون وشفاف، وهو هلام وارتون (WJ)، الذي تتمثل وظيفته الرئيسية في حماية الأوعية الدموية السرية.
يمكن الحصول على الخلايا الجذعية الوسيطة من أربع حجرات مختلفة من الحبل السري ويتم تصنيفها إلى الأنواع الأربعة التالية بناءً على مصادرها: الخلايا الجذعية الوسيطة الهلامية من وارتون (WJ-MSC)، والخلايا الجذعية الوسيطة المحيطة بالأوعية الدموية (PV-MSC)، والخلايا الجذعية الوسيطة تحت السلوية (SA-MSC)، والخلايا الجذعية الوسيطة السلوية (AM-MSC). الخلايا الجذعية الوسيطة من هذه الأجزاء الأربعة لها طرق عزل مختلفة.
س: ما هي مزايا الخلايا الجذعية الوسيطة الهلامية في وارتون (WJ-MSCs)؟
بالمقارنة مع الخلايا الجذعية الوسيطة من الأجزاء الأخرى من الحبل السري، فإن أداء WJ-MSCs أفضل من حيث القدرة التكاثرية، وإمكانية التمايز، والسلامة، وما إلى ذلك:
مزايا الكمية والعزل: يمثل هلام وارتون نسبة كبيرة من الحبل السري، وله أكبر مساحة وحجم، ويحتوي على خلايا جذعية متوسطية نجمية أكثر بكثير من المناطق الأخرى. ولا يتطلب عزلها معالجة إنزيمية معقدة، ويمكن الحصول على خلايا كافية من خلال زراعة قصيرة المدى، والتي لا تضمن فقط الحيوية والنقاء ولكنها تقلل أيضًا من خطر التلوث الميكروبي أثناء الزراعة.
إمكانات تمايز أقوى: تتمتع WJ-MSCs بقدرات تمايز عظمية وغضروفية أكثر بروزًا، ومعدل بقاء أعلى ومعدل انتشار، فضلاً عن قدرات انتشار وتجديد أقوى.
سلامة أعلى: مناعة منخفضة، لا تعبر عن MHC-Ⅱ؛ غير مسبب للأورام ويمتلك خصائص مضادة للالتهابات.
س: كيفية عزل هلام وارتون من الحبل السري؟
استخدم مقصًا طبيًا لقطع الحبل السري إلى شرائح نسيجية بحجم 2 سم، وشق كل قطعة على طول الوريد السري. استخدام ملقط الأنسجة لتقشير الطبقة الداخلية من الوريد السري، والجلد الخارجي، والشريانين السريين لفضح هلام وارتون بالكامل.
ينبغي تجريد هلام وارتون بالكامل من الأوعية الدموية الثلاثة والبشرة الخارجية. إذا لم يتم تجريدها بالكامل، فسوف تهاجر الخلايا غير المتجانسة الشبيهة بالظهارية، مما سيشغل مساحة نمو الخلايا الجذعية السرطانية ويؤدي إلى انخفاض عدد الخلايا المقطوعة. يصعب هضم هذه الخلايا بواسطة إنزيمات خفيفة ويمكن إزالتها عن طريق المرور. يمكن استخدام الحبل السري المعالج للتلقيح اللاحق عبر طريقة الزرع.
س: ما هي الأمور التي يجب ملاحظتها أثناء التلقيح بطريقة الزرع؟
قطع إلى كتل
يجب تقطيع هلام وارتون المعزول إلى قطع صغيرة يبلغ حجمها حوالي 3 مم. إذا كانت قطع الأنسجة صغيرة جدًا، فسيكون من الصعب التصاقها بالجدار، مما يؤدي إلى عدم هجرة الخلايا أو عدد قليل جدًا منها. إذا كانت قطع الأنسجة كبيرة جدًا أو لم يتم قطعها بالكامل، فلن تهاجر أي خلايا أيضًا. إذا كانت قطع الأنسجة مفرومة بالكامل بالمقص، فمن المحتمل أن يتسبب ذلك في فشل زراعة الخلايا الأولية.
التلقيح
وينبغي تلقيح قطع الأنسجة على وسط مناسب وفقا لحجم طبق/قارورة الثقافة، ويجب إضافة كمية مناسبة من وسط الثقافة. القليل جدًا من وسط الاستزراع سيمنع الخلايا من الهجرة خارج قطع الأنسجة، في حين أن الكثير منها سيؤدي إلى تعويم قطع الأنسجة، ولن تهاجر الخلايا بعد.
بعد التلقيح، ينبغي تجنب قطع الأنسجة من الحركة قدر الإمكان. من الأفضل إبقائهم دون إزعاج تمامًا في الحاضنة خلال الأيام السبعة الأولى باستثناء المكملات المتوسطة. ستؤدي الحركة المتكررة إلى تعليق قطع الأنسجة، مما يجعل من المستحيل على الخلايا أن تهاجر للخارج.
